熒光共聚焦顯微鏡使用紫外光作為光源,樣品發光或被熒光染料或熒光抗體染色后,照射待測物,受紫外光激發產生熒光。探測器對其進行探測,在顯微鏡下觀察物體的形狀和位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收和運輸,化學物質的分布和定位等。熒光顯微鏡也稱為寬視場熒光顯微鏡。成像面較厚,會觀察到焦平面上下的干涉信號,影響實驗結果。因此,熒光顯微鏡只能觀察靜態的亞細胞結構。那么它與激光共聚焦顯微鏡的區別在哪里?
1、原理不同
(1)熒光顯微鏡:熒光共聚焦顯微鏡以紫外光為光源,照射待測物體,使其發出熒光,然后在顯微鏡下觀察物體的形狀和位置。
(2)激光共聚焦顯微鏡:在熒光顯微鏡成像的基礎上,安裝激光掃描裝置,用紫外光或可見光激發熒光探針。
2、特點不同
(1)熒光顯微鏡:用于研究細胞內物質的吸收和運輸,化學物質的分布和定位等。細胞中的一些物質,如葉綠素,被紫外線照射后會發出熒光;有些物質本身不能發熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色,受到紫外線照射后也能發熒光。
(2)激光共聚焦顯微鏡:通過計算機進行圖像處理,從而獲得細胞或組織內部微結構的熒光圖像,在亞細胞水平上觀察Ca2+、pH值、膜電位等生理信號和細胞形態的變化。
3、用途不同
(1)熒光顯微鏡:熒光共聚焦顯微鏡是免疫熒光細胞化學的基本工具。它由光源、濾板系統和光學系統組成。用一定波長的光激發標本發出熒光,經物鏡和目鏡系統放大后觀察標本的熒光圖像。
(2)激光共聚焦顯微鏡:激光掃描共聚焦顯微鏡已用于細胞形態定位、三維結構重組、動態變化過程等研究,并提供定量熒光測量、定量圖像分析等實用研究手段。與其他相關生物技術相結合,已廣泛應用于形態學、生理學、免疫學、遺傳學等分子細胞生物學領域。